有关胶原蛋白的留言本

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在这里，您可以交流生物医学材料级大分子胶原、活性胶原蛋白多肽，也可以发布胶原蛋白商务合作信息

0.5M醋酸分散胶原聚集体（一种含胶原纤维的东西），稀释100倍，制成20ug/mL的溶液，移液枪移取7uL，于云母片上晾干（干燥器中），然后用原子力显微镜拍出了下面这个鬼东西，怎么肥事。。。救救孩子，不知道怎么测出来纤维的明暗条纹啊

不考虑探针固定和仪器本身的话，tapping模式振幅参数设置不适合这个样品，数值过大；

探针有问题，换根探针试试，也可能是震动造成的

胶原蛋白溶在0.5M乙酸或0.01M盐酸中，想把ph调到7，用0.1M氢氧化钠，但是在调到6左右时就发生蛋白质析出，溶液变得不粘稠，并且有很多白色絮状物出现，请教大神们，如何避免这种情况发生？

到胶原等电点了，就会析出蛋白，直接加碱就行，我一般加5M的氢氧化钠

看到文献里有这么一段话通过对胶原海绵进行傅里叶变换红外光谱分析(FTIR)分析可知,兔皮胶原海绵的酰胺Ⅰ带、酰胺Ⅱ带、酰胺Ⅲ带分别出现在1640cm~(-1)、1550cm~(-1)、1250cm~(-1),表明经酸解后,兔皮胶原蛋白中的酰胺为仲酰胺(R~1—CONH—R~2),其相对于伯酰胺(R—CONH_2)来说,因有较多取代基的存在而具有更大的分子量,而且在1450cm~(-1)处CH_2的弯曲振动形成的峰与酰胺Ⅲ带的峰面积比接近于1,从而证明了胶原蛋白的原生性和三螺旋结构的完整性

想求助大家，我想把材料接到去细胞基质上，材料是丝素蛋白，去细胞基质上也含有大量胶原蛋白，用EDC做交联可以吗？
看到的大多数文献都是水溶性的两种蛋白交联，我这种不能溶于水的固体物质，可行吗？

氨基酸是带有羧基的，碳化二亚胺是可以跟羧基交联的，不过一般需要加温到七八十度才行，常温反应很慢，当然这个也跟PH关系比较大，PH低，反应快。你这个可以参考溶剂型涂料用碳化二亚胺去做固化剂的体系，我的理解是你的实验可以反应，前提是你的碳化二亚胺是聚合型大分子的，100%的固含或者是本身溶解在溶剂里面

多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展，多肽的研究取得了惊人的、划时代的进展。人们发现存在于生物体的多肽已有数万种，并且发现所有的细胞都能合成多肽。同时，几乎所有细胞也都受多肽调节，它涉及激素、神经、细胞生长和生殖等各个领域。相当一段时间，人类对多肽的研究和应用将出现一个辉煌的时期，所以说本世纪是一个多肽的世界。

1、抗肿瘤多肽

肿瘤的发生是多种原因作用的结果，但都要涉及及癌基因的表达调控。不同的肿瘤产生时所需要的酶等调控因子不同，选择特异性小肽作用于肿瘤发生时所需的调控因子等，封闭其活性位点，可防止肿瘤发生。现在已发现很多肿瘤相关基因及肿瘤产生调控因子，筛选与这些靶点特异结合的多肽，已成为寻找抗癌药物的新热点。美国学者发现了一个小肽（6个氨基酸），它在体内能显著抑制腺癌的生长，包括肺、胃及在大肠腺癌为治疗这一死亡率很高的恶性肿瘤开辟了一条新路。瑞士科学家发现另外一个小肽（8个氨基酸），它能进入肿瘤细胞，激活抗癌基因P53，诱导肿瘤细胞的凋亡。

2、抗病毒多肽

病毒感染后一般要经历吸附（宿主细胞）、穿入、脱壳、核酸复制，转录翻译，包装等多个阶段。阻止任一过程均可防止病毒复制。最有效的抗病毒药物应该是作用在病毒吸附及核酸复制两个阶段，因此筛选抗病毒药物主要集中在病毒复制的这两个阶段。病毒通过与宿主细胞上的特异受体结合吸附细胞，依赖其自身的特异蛋白酶进行蛋白加工及核酸复制。因此可从肽库内筛选与宿主细胞受体结合的多肽或能与病毒蛋白酶等活性位点结合的多肽，用于抗病毒的治疗，这将成为是替代抗生素药的最大市场。

3、多肽导向药物

已知很多毒素（如绿脓杆菌外毒素），细胞因子（如白细胞介素系列）等有较强的肿瘤细胞毒性，但在人类长期或大量使用量时也可损伤正常细胞。将能和肿瘤细胞特异结合的多肽与这些活性因子进行融合，则可将这些活性因子特异性地集中在肿瘤部位，可大大降低毒素、细胞因子的使用浓度，降低其副作用。比如，在很多肿瘤细胞表面存在表皮生长因子的受体，其数量较正常细胞上的数目高几十倍，甚至上百倍，将毒素或抗肿瘤细胞因子与表皮生长因子融合，可将这些活性因子特异地聚集到肿瘤细胞，国内外已有几家将表皮生长因子与绿脓杆菌外毒素融合表达成功。同从肽库内筛选出能与肿瘤抗原特异结合的小肽，也可用于导向药物，因其分子量小，比鼠源性的单克隆抗体更适合用于导向药物。

4、细胞因子模拟肽

利用已知细胞因子的受体从肽库内筛选细胞因子模拟肽，近年成为国内外研究的热点。国外已筛选到了人促红细胞生成素，人促血小板生成素，人生长激素、人神经生长因子及白细胞介素1等多种生长因子的模拟肽，这些模拟肽的氨基酸序列与其相应的细胞因子的氨基酸序列不同，但具有细胞因子的活性，并且具有分子量小的优点。这些细胞因子模拟肽正处于临床前或临床研究阶段。

5、抗菌性活性肽

当昆虫受到外界环境刺激时产生大量的具有抗菌活性的阳离子多肽，已筛选出百余种抗菌肽，体内外实验证实，多个抗菌肽不仅有很强的杀菌能力还能杀死肿瘤细胞。例如，从蚕体内筛选的抗菌肽D表现了很好的应用前景，并能利用基因工程技术生产。蛇毒内也存在多种活性多肽，从蛇毒内分离出一个13个氨基（INKAIAALAKKLL）小肽，其对G+及G-菌均有极强的杀菌能力

6、用于心血管疾病的多肽

很多植物中药有降血压、降血脂、溶血栓等作用，不仅可用作药物，亦可用作保健食品。但由于其作用成份不能确定。其应用受到很大限制。现已发现很多有效成分是小分子多肽，比如我国科学家从大豆内加工分离出的活性多肽，可通过小肠直接吸收，能防治血栓，高血压和高血脂，还能延缓变老，提高肌体肿瘤力。从人参、茶叶、银杏叶等植物内也分离出很多用于心血管疾病的小肽。

7、其它药用小肽

小肽药物除在上述几大方面已取得较大进展外，在其它很多领域也取得一些进展。比如stiernberg等发现一个合成肽（TP508）肽能促进伤口血管的再生，加速皮肤深度伤口的愈合。Pfister等发现一个小肽（RTR）4能防止碱损伤角膜内炎症细胞的侵润，抑制炎症反应。Carron等证实其筛选的2个合成肽能抑制破骨细胞对骨质的重吸收。

8、诊断用多肽

多肽在诊断试剂中最主要的用途是用作抗原检测病毒、细胞、支原体、螺旋体等微生物和囊虫、锥虫等寄生虫的抗体，多肽抗原比天然微生物或寄生虫蛋白抗原的特异性强，且易于制备，因此装配的检测试剂，其检测抗体的假阴性率和本底反应都很低，易于临床应用。现在用多肽抗原装配的抗体检测试剂包括：甲、乙、丙、庚或肝病毒、艾滋病病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、风疹病毒、梅毒螺旋体、囊虫、锥虫、莱姆病及类风湿等。使用的多肽抗原大部分是从相应致病体的天然蛋白内分析筛选获得，有些是从肽库内筛选的全新小肽。

9、多肽疫苗

多肽疫苗与核酸疫苗一样是目前疫苗研究领域内较受重视的研究方面之一。尤其是对病毒多肽疫苗进行了大量研究。目前对人类危害极大的两种病毒性疾病艾滋病和丙型肝炎均无理想的疫苗，核酸疫苗和多肽疫苗的研究结果令人鼓舞。1999年美国NIH公布了两种HIV-I病毒多肽疫苗，对人体进行的Ⅰ期临床试验结果，证实两种多肽能刺激机体产生特异性抗体和特异性细胞免疫，并有较好的安全性。我国清华大学也证实HIV-I膜蛋白内一段多肽有很强的免疫原性。丙肝病毒多肽疫苗也显示有良好的发展前景，国外学者从丙肝病毒（HCV）外膜蛋白E2内筛选出一般多肽，它可刺激机体产生保护性抗体。其它病毒（如甲肝、麻疹、辛德毕斯病毒等）的多肽疫苗及抗肿瘤，避孕等多肽疫苗的研究也取得了较大进展。例如，美国学者NaZ等从噬菌体肽库内筛选出一个12氨基酸小肽，它能特异性地与人卵子结合，阻止精子与卵子的结合，可用于避孕疫苗。

10、多肽药物载体

多肽用作药物载体，既可以用作药物载体的修饰剂，也可以作为药物载体的主要组成部分。Law等设计了蛋白酶断裂点连接的肽段在合适的溶剂中自组装后将药物包覆在微球内，遇到靶向蛋白酶使得断裂点断开，实现药物的靶向释放。彭师奇等将精氨酸-甘氨酸-天氨酸-丝氨酸（Arg-Gly-Asp-Ser，RGDS）四肽修饰脂质体用作药物载体导向溶栓。运用血小板的纤维蛋白原（FG）受体配基RGDS肽作为导向归巢装置，偶联于包裹尿激素UK的脂质体。载体与药物之间以酸敏感性共价键的形式连接，在自然界或人体内能生物降解成内源性物质Glu，不易产生积蓄和毒副作用。

11、组织工程材料

一些不具有生物活性的高分子多肽，如聚天冬氨酸、聚赖氨酸、聚谷氨酸等，由于具有良好的生物相容性、可控生物降解速率、可修饰性、设计的可塑性、结构的可控性等优点，逐渐成为组织工程中极具应用前景的一类新型材料。Langer等制备了聚（乳酸-赖氨酸），将RGD肽接枝到聚合物中赖氨酸的-NH2上，有效提高了聚合物表面的细胞粘附能力，克服了主链无活性基团的不足，获得的组织工程支架材料既便于细胞识别，又能支持细胞生长。

12、多肽营养食品

活性肽类食品作为一种新型保健食品或食品添加剂，具有独到的特性和功能，在营养学上也有着许多优点，在食品工业中具有广阔的应用前景。

13、化妆品多肽

三肽是生长因子，四肽有消炎效果，五肽可促进胶原蛋白增加皮肤厚度，六肽是类肉毒杆菌素，可放松皱纹，至于九肽则可阻断促黑激素，有美白效果。就目前的研究结果来看，应用在化妆品的多肽主要是六个氨基酸残基以内的多肽，如果肽链超过六个残基，皮肤已经不容易吸收，因此可以临床应用的氨基酸数目重迭性相当高。而且除了五肽（Matrixyl）、六肽（Argireline）有少许的临床及基础研究以外，一些新的多肽，特别是组合肽，疗效成谜。

组化作为基础的免疫学实验，每个小步骤中却包含着决定成败的技巧，这些你都知道吗，就让小编总结下给到你吧。
1.固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。
Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。
PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2.组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
3.切片时展片：有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4.烤片：60℃ 30分钟或37℃ 过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
5.蜡块及切片的保存：最好在4℃保存
6.脱片问题：Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如不行，可用双重处理(APES和Poly-L-Lysine)的切片。在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。
7.灭活内源性酶：HRP系统：3%双氧水灭活;AP系统：3%HAc灭活。
8.暴露抗原：对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书)。对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。
9.封闭：在山羊血清封闭，非特异性染色仍然较强时，可延长封闭时间或用浓缩血清封闭
10.抗体稀释：应遵循“现用现配”的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。
11.背景高：在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特别是在显色之前要多洗。
12.返蓝：在苏木素复染后，可用碱性缓冲液(如PBS)或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。
13.显色：一定要在显微镜下观察，注意控制背景。
14.在整个操作过程中，切片千万不能干燥，否则会有非特异性染色。

最好是水溶解胶原了，溶解浓度要看你胶原能溶解多少了，据我所知，国内胶原大概能溶1mg/ml就很不错了，灭菌的话，可以将干胶原在超净台紫外灭菌过夜，用无菌水再溶解，应该也可以溶解后再高压灭菌。不过建议你可以选用明胶来提高生物相容性，它的溶解性比胶原要好，不过要需要加热到70度溶解。

亲爱滴
胶原是水溶性的
复合上去没问题
沾水后就会掉下来
如果用交联剂，就不是胶原啦

胶原的浓度选择要看你的材料和胶原的溶解度，这个我给不出太多意见。做些实验来验证下，材料和胶原的性能吧。
2楼说的很好，只是国内胶原的浓度方面不敢苟同，国内现在也有8mg胶原，甚至30+mg都有。
干品灭菌紫外辐照可以，保守些就用钴60射线吧。
溶液的话，基本上没什么办法。胶原过不去.22的滤膜。实验室基本上直接用.5M的HAc溶解，就不灭菌了。不过我们是等胶原干掉后，再使用的。。。之后有一个射线灭菌，在上细胞。
若是选用明胶可以采用滤器除菌。明胶降解太快，而且质量较差，不太推荐你用。

请教一下各位大侠，我准备往我的材料上面复合一层胶原，以增强它的细胞相容性。想请问下，用什么溶剂，用多大的胶原浓度呢？另外，因为我要做细胞实验，想问下这个胶原溶液用什么来灭菌呢？谢谢了

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